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玉米赤霉烯酮檢測試劑盒-競爭法

發布時間:2022-11-01   點擊次數:256次

玉米赤霉烯酮檢測試劑盒 使用說明書 (酶聯免疫法) 1 原理及用途 本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法檢測谷物、飼料、食用 油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN) (又稱 F-2 毒素),試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根 酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入 標準品或樣本溶液,樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標板上預包被 偶聯抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體,加入酶標記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負相 關,與標準曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。 2 技術指標 2.1 試劑盒靈敏度:0.3ppb(ng/ml) 2.2 反應模式:25℃,30min~15min 2.3 檢測下限: 谷物及其食品原料…………………6ppb 飼料及飼料原料………………………18ppb 玉米皮、麥麩…………………………18ppb 2.4 交叉反應率: 玉米赤霉烯酮……………………100% 玉米赤霉酮………………………13% 玉米赤霉醇………………………<1% 2.5 樣本回收率: 谷物及其食品原料…………………90%±15% 飼料及飼料原料………………………80%±15% 玉米皮、麥麩…………………………80%±15% 3 試劑盒組成 酶標板……………………………96 孔 標準液(黑蓋):各 1ml 0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb 酶標記物(紅蓋)…………………5.5ml 抗體工作液(藍蓋)………………5.5ml 底物液 A(白蓋)…………………6ml 底物液 B(黑蓋)……………………6ml 終止液(黃蓋)………………………6ml 20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml 說明書…………………………………1 份 蓋板膜…………………………………1 張 自封袋…………………………………1 個 4 需要的器材和試劑 4.1 儀器:酶標儀、打印機、均質器 、振蕩器、離心機、刻 度移液管、天平(感量 0.01g) 4.2 微量移液器:單道 20µl-200µl,100µl-1000µl、多道 300µl 4.3 試劑:甲醇、去離子水 5 樣本前處理 5.1 樣本處理前須知: 實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實 驗結果。 5.2 配液: 配液 1:樣本提取液 90%甲醇,即 V 甲醇:V 去離子水=9:1。 配液 2:工作洗滌液 將濃縮洗滌液 20 倍稀釋(1 份洗滌液加 19 份去離子水)。 5.3 樣本前處理步驟: 5.3.1 谷物(大米、玉米、小米等低脂含量)及其食品原料 1)稱取 2g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加 8ml 樣本提取液, 振蕩 5 分鐘,室溫 4000 轉/分離心 10 分鐘; 2)取 0.5ml 上清,加入 2ml 去離子水,混勻; 3)取 50μl 進行分析。 稀釋倍數:20 檢測下限:6ppb 5.3.2 飼料及飼料原料 1)稱取 2g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加 8ml 樣本提取液, 振蕩 5 分鐘,室溫 4000 轉/分離心 10 分鐘; 2)取 0.5ml 上清,加入 1ml 提取液,震蕩混勻; 3)取 0.5ml 混勻液體,加入 2ml 去離子水,混勻; 4)取 50μl 進行分析。 稀釋倍數:60 檢測下限:18ppb 5.3.3 玉米皮、麥麩等吸水性強的樣本 1)稱取 2g 粉碎樣品于 50ml 離心管中,加 24ml 樣本提取液, 振蕩 5 分鐘,室溫 4000 轉/分離心 10 分鐘; 2)取 0.5ml 上清,加入 2ml 去離子水,混勻; 3)取 50μl 進行分析。 樣本稀釋倍數:60 檢測下限:18ppb 注:由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態,取樣時需多點取 樣充分混勻后再取 2g 進行試驗。 6 酶聯免疫試驗步驟 將所需試劑從 4℃冷藏環境中取出,置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解, 每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框 架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于 2-8℃。 6.1 編 號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本 和標準品做 2 孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。 6.2 加樣反應:加標準品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中,然 后加酶標記物 50µl/孔,再加入 50µl/孔的抗體工作液,用蓋 板膜封板,輕輕振蕩 5 秒混勻,25℃反應 30 分鐘。 6.3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內液體,每孔加 350ul 工作洗滌液,靜置 30 秒后棄去,重復洗滌 5 次,最后一次拍 干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺 破)。 6.4 顯 色:每孔加入底物液 A 50µl,再加底物液 B 50µl, 輕輕振蕩 5 秒混勻,25℃避光顯色 15 分鐘(若藍色過淺,可 適當延長反應時間)。產品縮寫:ZEN 貨號:RJ-P100055 版本:2022.1 2 6.5 終 止:每孔加入終止液 50µl,輕輕振蕩混勻,終止反 應。6.6 測吸光值:用酶標儀于 450nm 處測定每孔吸光度值(建議 用雙波長 450/630nm)。測定應在終止反應后 10 分鐘內完成。 7 結果分析 7.1 百分吸光率的計算 標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸 光度值的平均值(雙孔)除以第一個標準液(0ppb)的吸光度 值,再乘以 100%,即 百分吸光度值(%)= A ×100% A0 A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 A0—0ppb 標準溶液的平均吸光度值 7.2 標準曲線的繪制與計算 以標準液百分吸光率為縱坐標,對應的標準液濃度(ppb) 的對數為橫坐標,繪制標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分 吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃 度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。 若利用試劑盒專業分析軟件進行計算,更便于大量樣本的 準確、快速分析。(歡迎來電索?。?8 注意事項 8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致 所有標準的 OD 值偏低。 8.2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲 線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行 下一步操作。 8.3 混合要均勻,洗板要,在 ELISA 分析中的再現性,很 大程度上取決于洗板的一致性。 8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。 8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試 劑盒中的試劑。 8.6 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。0 標準的吸光 度值小于 0.5 個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質。 8.7 反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。 9 貯藏及保存期 儲藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,避免冷凍。 保 質 期:該產品有效期為 1 年,生產日期見包裝盒。

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