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倉鼠Elisa試劑盒樣品稀釋的方法和步驟

發布時間:2022-05-17   點擊次數:295次
  倉鼠Elisa試劑盒檢測的原理是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗。計算方法是以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
  倉鼠Elisa試劑盒在沒有去離子水或雙蒸水時,可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,切勿使用自來水。
  1.樣品稀釋:酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如產品應取10u1樣品進行稀釋,個別用戶取5u1甚至1u1樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數不準確,檢測結果出現問題。
  2.試劑盒平衡:試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒打開盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
  3.加樣:盡量操作規范,將液體垂直懸空快速加入到微孔板中,避免加到孔避上。加完試劑后用手適當振蕩或在桌面適當作圓周運動,使孔內試劑充分混勻,蓋好蓋板膜。
  4.洗板:洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置10-15s,甩去板孔中洗液后,一定要用力拍干;及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果。
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